黑木耳(Auricularia auricula)附庸于真菌界(Fungi)担子菌门(Basidiomycetes)蘑菇纲(Agaricomycetes)木耳目(Auricularia)木耳科(Auriculariaceae)木耳属(Auricularia)[1]。黑木耳别名木耳、光木耳、木鸡[2]，具有润肺养胃、滋阴补血、普及机体免疫力、抗软弱、降血糖、降血脂等功效色五月小说，有很大的食用价值和药用价值[2-6]。我国事寰球黑木耳第一世产国，占寰球黑木耳总产量90%以上[7]。
我国事农业坐褥大国，每年农作物秸秆产量约6亿t，常见的秸秆处理步调是奏凯打消或速即掩埋，这些处理不仅羞耻环境，况且还形成一定的资源蹧跶，因此，农业剩余物的高效利用和环境保护如故成为农业发展亟待措置的关键问题[8]。传统黑木耳坐褥基质主要以杂木屑为主，跟着黑木耳产业的快速发展，林业资源日益弥留，“菌林矛盾”问题加重，寻找新的基质替代杂木屑进行黑木耳辅助山水相连[9]。因此，利用豆秸秆、小麦秸秆等纤维素和木质素含量丰富的农业剩余物辅助黑木耳，不仅缓解了原料的开端问题，况且资源利用率高、老本低、收益快，既能匡助农民增多收益，又能改善生态环境[10]。连年来，我国已有好多利用农业剩余物辅助食用菌的报谈，如桑黄[11]、猴头菇[12]、秀珍菇[13]、金针菇[14]等。因此，利用农业剩余物辅助黑木耳具有一定的表面基础。
本探究评价不同“农业剩余物”算作基质对黑木耳菌丝滋长的影响，并进行基质组分统计优化，应用Design-Expert 8.0.6.1中单纯形格子法进行配方设想，探究各主料交互作用对胞外酶活、菌丝滋长速率和菌丝滋长指数的影响，以期筛选出一个合适黑木耳菌丝滋长的农业剩余物配方。
1 材料与步调 1.1 材料 1.1.1 供试菌株黑木耳编号为2020112004，贵州大学农学院植物病理教研室提供。
1.1.2 供试材料大豆秸秆粉、油菜秸秆粉、小麦秸秆粉、花生秸秆粉、玉米秸秆粉、杂木屑、麦麸、蔗糖、石膏，均由贵州大学农学院植物病理教研室提供。
1.1.3 主要试剂和仪器漆酶酶活试剂盒、多酚氧化酶酶活试剂盒、纤维素酶酶活试剂盒，苏州梦犀生物医药科技有限公司。高压灭菌锅，上海博迅实业有限公司；超净责任台，北京东联哈尔仪器制造有限公司；多功能酶标仪，伯腾仪器有限公司；电子天平，上海精密科学仪器有限公司；生化培养箱，上海博讯医疗生物仪器股份有限公司。
1.1.4 培养基称取大豆秸秆粉、小麦秸秆粉、油菜秸秆粉、花生秸秆粉、玉米秸秆粉和杂木屑各15 g，算作配方的主要要素，其他辅料要素不变(对照配方[15]：杂木屑78%，麦麸20%，石灰粉1%，蔗糖1%)。每种配方等量分装于3个直径为90 mm的培养皿中，含水量60%，pH 7.0，121 ℃灭菌120 min，冷却至室温备用。
1.2 步调 1.2.1 粗酶液的索要粗酶液索要参照吴周斌等[16]的步调。
1.2.2 酶活的测定漆酶酶活的测定参照韩增华等[17]的步调。漆酶酶活力单元界说为：以每毫升培养酶液与底物作用30 min内调动0.1光密度值为1个活力单元U色五月小说。多酚氧化酶酶活测定参照Tang等[18]的步调。多酚氧化酶酶活力单元界说为：每分钟每克组织在每毫升反应体系中使525 nm处吸光值变化0.005为1个酶活力单元U。纤维素酶酶活的测定参照李静等[19]的步调。纤维素酶酶活力单元界说为：每克组织每分钟催化产生1 μg葡萄糖界说为1个酶活力单元U。
1.2.3 配方设想应用单纯形格子法(simplex-lattice design)[20]将应变量(Y)与自变量(X)进行关联，狂放主料要素落魄界，对初筛出的3种主料进行配方设想，最终设想出10个配方(表 1)。0%≤X1≤100%；0%≤X2≤100%；0%≤X3≤100%；X1+X2+X3=100%。
1.2.4 评价指数测定黑木耳菌丝滋长历程中的5个评价贪图：漆酶酶活、多酚氧化酶酶活、纤维素酶酶活、菌丝滋长速率和菌丝滋长指数，3种酶活齐在菌丝滋长第7天测定。
菌丝滋长速率[21]：经受划线法，按菌丝滋长速率=菌落平均半径(mm)/培养时辰(d)，诡计各菌株在供试培养基上的菌丝滋长速率。
菌丝滋长指数[22]：菌丝滋长速率(mm/d)×菌丝长势评分。
2 恶果与分析 2.1 初筛恶果由初筛恶果(图 1)可知，杂木屑基质菌丝滋长速率最高，权贵高于农业剩余物基质，达到2.9 mm/d，计议产生此恶果的原因是杂木屑的C/N更合适黑木耳菌丝滋长；其次是大豆秸秆和油菜秸秆，辨别为2.42 mm/d和2.15 mm/d。由此筛选出杂木屑、大豆秸秆和油菜秸秆3种基质作念主料，进行下一步纪念模子方差分析。
日本动漫 2.2 各配方长势评分恶果对各平板菌落长势进行评分，恶果如表 2所示。菌落长势评分依据：1分暗意菌丝长势寥落，不均匀；2分暗意菌丝长势较寥落，不均匀；3分暗意菌丝长势较寥落，较均匀；4分暗意菌丝长势较浓密，均匀；5分暗意菌丝长势浓密，均匀[22]。
2.3 各评价指数二次多项纪念模子方差分析 2.3.1 菌丝滋长速率菌丝滋长速率纪念方程为：
由表 3可知，主料X1X2 (杂木屑和油菜秸秆)、X1X3 (杂木屑和大豆秸秆)、X1X22X3 (杂木屑、油菜秸秆和大豆秸秆)、X1X2X32 (杂木屑、油菜秸秆和大豆秸秆)的交互作用成极权贵水平(P < 0.01)，标明这4种交互作用不错权贵影响菌丝滋长速率。联接纪念方程可知，X1X2 (K=2.17)、X1X3 (K=1.86)、X1X22X3 (K=37.00)的K值大于0，标明这3种交互作用不错权贵普及菌丝滋长速率，X1X2X32 (K=–43.95)的K值小于0，标明这种交互作用不错权贵裁汰菌丝滋长速率。等高线图心绪越趋近于红色标明数值越高，也讲明对菌丝滋长速率孝顺率越高；越趋近于蓝色标明数值越低，也讲明对菌丝滋长速率孝顺率越低。由图 2可知，3种主料孝顺率最高为杂木屑，其次是大豆秸秆和油菜秸秆。由菌丝滋长速率实测值与考虑值线性关联性图可知，所稀有据点齐漫衍在中间的直线周围，讲明模子实测值和考虑值拟合度较好，不错很好地拟合菌丝滋长速率和主料之间的相干。
2.3.2 菌丝滋长指数菌丝滋长指数纪念方程为：
由表 4可知，主料X12X2X3、X1X22X3、X1X2X32的交互作用成极权贵水平(P < 0.01)，不错权贵影响菌丝滋长指数。联接纪念方程可知，X12X2X3 (K=324.78)和X1X22X3 (K=146.67)交互作用不错权贵普及菌丝滋长指数，X1X2X32 (K=‒172.11)交互作用不错权贵裁汰菌丝滋长指数。3种主料孝顺率最高为杂木屑，其次是大豆秸秆和油菜秸秆；模子实测值和考虑值拟合度较好，不错很好地拟合菌丝滋长指数和主料之间的相干(图 3)。
2.3.3 漆酶酶活漆酶酶活纪念方程为：
由表 5可知，主料X1X2、X2X3、X12X2X3的交互作用成极权贵水平(P < 0.01)，不错权贵影响漆酶活性。由纪念方程可知，X1X2 (K=1 068.65)、X2X3 (K=961.13)和X12X2X3 (K=27 247.98)这3种交互作用不错权贵普及漆酶活性。3种主料对漆酶活性孝顺率最高为大豆秸秆，其次是油菜秸秆和杂木屑；漆酶酶活的实测值和考虑值拟合度较好，不错很好地拟合漆酶酶活和主料之间的相干(图 4)。
2.3.4 多酚氧化酶酶活多酚氧化酶酶活纪念方程为：
由表 6可知，主料X12X2X3和X1X22X3的交互作用成极权贵水平(P < 0.01)，不错权贵影响多酚氧化酶活性。由纪念方程可知，交互作用X12X2X3 (K=72 378.71)可权贵普及多酚氧化酶活性，交互作用X1X22X3 (K=‒49 057.07)可权贵裁汰多酚氧化酶活性。3种主料对多酚氧化酶活性孝顺率最高为油菜秸秆，其次是大豆秸秆和杂木屑；多酚氧化酶酶活的实测值和考虑值拟合度较好，不错很好地拟合多酚氧化酶酶活和3种主料之间的相干(图 5)。
2.3.5 纤维素酶酶活纤维素酶酶活纪念方程为：
由表 7可知，主料X1X2、X1X3、X12X2X3和X1X22X3的交互作用成极权贵水平(P < 0.01)，不错权贵影响纤维素酶活性。由纪念方程可知，交互作用X1X2 (K=279.11)和X1X22X3 (K=6 098.81)可权贵普及纤维素酶活性，交互作用X1X3 (K=‒319.20)、X12X2X3 (K=‒3 583.21)可权贵裁汰纤维素酶活性。3种主料对多酚氧化酶活性孝顺率最高为杂木屑，其次是油菜秸秆和大豆秸秆秸秆；模子拟合度较好，不错很好地拟合纤维素酶酶活和3种主料之间的相干(图 6)。
2.4 最优配方考虑通过狂放要素落魄界，设定各评价指数守望反馈值限制，最终考虑出一个最优配方：杂木屑49.4%，油菜秸秆16.4%，大豆秸秆12.2%，麦麸20.0%，蔗糖1.0%，CaSO4 1.0%。
2.5 考证施行将考虑配方和对照配方再行进行一次平板施行，每个配方3个近似，测定菌丝滋长速率、菌丝滋长指数、漆酶酶活、多酚氧化酶酶活和纤维素酶酶活(表 8)。由表 8可知，考虑配方的菌丝滋长速率、菌丝滋长指数和漆酶酶活均高于对照配方，标明考虑配方不错替代对照配方进行黑木耳菌丝培养。
3 探究与论断混料设想是相比合适食用菌配方优化的一种步调，不错优化出最合适食用菌菌丝滋长的基质配比。连年来。好多学者齐利用混料设想步调优化常见食用菌配方，如艾啸威[23]利用混料设想步调优化出合适海鲜菇滋长的油茶壳配方；范冬雨等[24]利用混料设想步调优化出合适玉木耳滋长的东谈主工林配方；王倩等[25]利用混料均匀设想步调优化出双孢菇覆土材料最优配方；叶建强等[26]利用混料设想步调优化出最合适灰树花辅助的农业剩余物配方。因此，本施行利用混料设想中的单纯形格子法优化合适黑木耳菌丝滋长的“以草代木”配方，具有一定的表面基础。本探究恶果标明，在5种农业剩余物中，大豆秸秆最合适黑木耳菌丝滋长，其次是油菜秸秆。杂木屑、油菜秸秆和大豆秸秆三者之间的交互作用可权贵影响菌丝滋长速率、菌丝滋长指数、漆酶酶活、多酚氧化酶酶活和纤维素酶酶活，其中交互作用X12X2X3可权贵普及菌丝滋长指数、漆酶酶活和多酚氧化酶酶活，可权贵裁汰纤维素酶酶活；交互作用X1X22X3可权贵普及菌丝滋长速率、菌丝滋长指数和纤维素酶酶活，可权贵裁汰多酚氧化酶酶活；交互作用X1X2X32可权贵裁汰菌丝滋长速率和菌丝滋长指数。由此可知，不同基质配比对不同酶活的影响也不同，这与吴周斌等[16]探究恶果一样。计议不同基质配比的C/N不同，是以对不同农艺时事的影响有各别。不同交互作用菌丝滋长速率和菌丝滋长指数的影响一样，标明菌丝滋长速率是影响菌丝滋长指数的主要因素。
分析各农艺时事二次纪念模子，狂放不同要素落魄界，设定不同农艺时事守望反馈值，最终优化出合适黑木耳菌丝滋长的农业剩余物配方：杂木屑49.4%色五月小说，油菜秸秆16.4%，大豆秸秆12.2%，麦麸20.0%，蔗糖1.0%，CaSO4 1.0%。通过考证施行标明该配方不错替代对照配方进行黑木耳菌丝培养，本探究恶果不错为今后黑木耳草腐化辅助提供表面依据。